阐述了荧光分光光度计检出限测量结果的不确定度评定过程和方法， 对不确定度来源进行分析， 并 终给出测量结果的扩展不确定度。

荧光分光光度计是用来测定荧光物质的性质和含量 的分析仪器， 具有灵敏度高、 选择性强、 用样量少、 方 法简便、 工作曲线线性范围宽等优点， 可以广泛应用于 生命科学、 有机和无机化学等领域。 1 概述 1.1 测量依据 根据 JJG 537—2006 《荧光分光光度计》 的相关要 求进行测量。 1.2 环境条件 环境温度 （20±10） ℃， 且相对稳定； 相对湿度不 大于 85%； 电源电压 (220±22) V。 1.3 计量标准 计量标准为硫酸奎宁荧光标准物质， 标准物质号： GBW (E) 130100； 标准物质标准值： 98.6%； 相对扩展 不确定度： Urel=0.5%， k=2。 1.4 被测对象 荧光分光光度计， 对 于 配 制 A 类单色器的仪器， 其检出极限为不大于 5×10-10 g/mL； 对于配制 B 类单色 器的仪器， 其检出极限为不大于 1×10-8 g/mL。 1.5 测量方法 按照规程规定的检定条件， 使仪器处于运行状 态。 用 0.05 mol/L 硫酸溶液做空白溶液， 选取规定浓度 硫酸奎宁标准溶液。 灵敏度置， 选择适当的狭缝 宽度。 根据激发波长在 350 nm、 发射波长在 450 nm 左 右的原则， 设定两侧的波长或选择滤光片。 对空白溶液 与标准溶液进行连续交替 11 次测量。 按规程中的公式 计算仪器检出限。 2 数学模型及不确定度传播率 2.1 数学模型 被测荧光分光光度计检出限的计算公式为： （1） 式中： DL——检出限； ——11 次测量的平均荧光强度； c——标准溶液的质量浓度； s——单次测量的标准偏差。 2.2 不确定度传播率 仪器检出限的不确定度传播率计算公式为： （2） 2.3 灵敏系数 公 式 （2） 中的 灵 敏 系 数 c1= ， c2= ， c3= 。 3 标准不确定度评定 按照规程要求， 以一台型号为 F2500 的荧光分光光 度计为例， 其检出限测量数据如表 1 2 所示 F ?。

4 标准不确定度的评定 4.1 溶液测量重复性引入的不确定度分量 u （s） 计算出单次测量的标准偏差 s=0.553， 规程中规定 测量重复性次数为 3 次， 则溶液测量重复性引入的不确定度分量 = =0.319 4.2 由仪器的直接测量结果引入的不确定度分量 （1） 用仪器直接测量空白溶液， 由于时间、 环境温 度等影响， 引起零点漂移的偏差不超过 0.5%， 其值符 合均匀分布， 其不确定度为 =0.5%× =0.239 1 （2） 用仪器直接测量标准溶液， 由于时间、 环境温 度等影响， 引起零点漂移的偏差不超过 1.5%， 其值符 合均匀分布， 其不确定度为 =1.5%× =0.911 5 4.3 由标准溶液的稀释配制引入的不确定度分量 u （c） 标准溶液浓度计算公式为： c= （3） 式中： c——标准溶液浓度； m——硫酸奎宁标准物质的质量； V——稀释体积。 （1） 配制 500 mL 浓度为 1×10-5 g/mL 的硫酸奎宁储 备液时， 称量硫酸奎宁固体标准物质的质量为 5.00 mg。 天平称量引入的不确定度为天平检定的大允许误差± 0.5 mg， 由天平称量引入的不确定度分量为 u （c1） = mg， 符合正态分布。 传播系数为 mL-1 ， 则 u （c1） =5.8×10-7 g/mL （2） 配置 500 mL 浓度为 1×10-5 g/mL 的硫酸奎宁储 备液时， 500 mL 容量瓶检定合格达到 A 级的大允许 误差为±0.25 mL， 由容量瓶定容引起的不确定度分量为 u （c2） = =0.144 mL， 符合 正 态 分 布 。 传 播 系 数 为- ， 则 u （c2） =2.9×10-9 g/mL 4.4 二级标准物质硫酸奎宁引入的不确定度分量 u （c3） （1） 硫 酸奎宁荧光标准物质的不确定度为 Urel= 0.5%， k=2 （根据标物证书得到）， 分量为 0.25%， 按照 称样量换算成不确定度为 0.002 5×0.005=1.25×10-5。

g， 传播系数为 mL-1 ， 则 u （c3） =5.8×10-7 g/mL （2） 标准溶液是由储备液按 1： 10、 1： 10、 1:100 分 3 次稀释得到的， 在此过程中所用到的玻璃量器有 25 mL 移液管、 250 mL 容量瓶等， 其合成后的不确定 度分量 u （c4） =1×10-11 g/mL 4.5 标准不确定度一览表5 合成标准不确定度 以上标准不确定度分量合成的标准不确定度 uc （DL） = =5.2×10-9 g/mL 6 扩展不确定度 测量荧光分光光度计检出限的相对扩展不确定度为 U=1.0×10-8 g/mL， k=2 7 结束语 由计算结果可以看出， 以校准荧光分光光度计检出 限项目为例， 标准溶液配制、 标准物质的称量和标准物 质本身的不确定度 3 个因素对评定结果的影响较大。 这 就要求选取硫酸奎宁标准物质时尽量选取不确定度小的 一级标准物质， 称量标准物质时尽量选取有效数字多的 一级天平， 同时在标准溶液配制时选用经过检定的玻璃 量具仔细称量， 尽量减小人为误差， 这样才能对后的 结果做出准确评定。