目前, 吸收光度分析已普遍运用, 其中紫外分 光光度法是应用广泛的分析方法之一。紫外分光 光度法是通过可见- 紫外分光光度计, 产生可见光, 紫外线照射某些不同物质, 不同浓度的物质吸收光 谱不同, 可获得不同吸收光谱的曲线, 同时它们的 吸收峰数值与浓度成正比关系, 遵循朗伯- 比尔定 律, 能够鉴别中草药和测定其有效成分的含量。 1 定性分析 1.1 鉴定物质 朱华[1]、用分光光度计分别对水八角和羊开口进行了 鉴定, 为水八角和羊开口的开发利用提供了参考依 据。方法如下: 称取水八角粗粉 2 g, 加 20 ml 乙醇, 浸泡 24 h 后, 超声提取 1 h, 过滤, 吸收滤液 1 ml, 加入 95%乙醇, 稀释 50 倍, 以 95%乙醇做空白对 照, 在波长 400～ 800 nm波长范围内测定光谱图。结 果在波长为 414.0 nm和 665.0 nm处有两个大吸 收峰。取羊开口粗粉 5 g, 加乙醇 50 ml, 回流提取 1 h, 过滤, 取滤液 10 ml, 稀释 100 倍摇匀, 以 95% 乙醇做空白对照, 在 200～ 800 nm 波长范围内测定 光谱, 结果在 273.0 nm和 219.0 nm处有两个明显吸收峰。郭建平等用紫外分光光度法对 15 种紫金 牛属药物进行了鉴定, 并分类进行比较, 找到了一 定的鉴别特征[2]。 1.2 鉴别物质 中药侧柏常与同科植物柏树叶发生混淆, 由于 两种外形、显微组织结构酷似, 均含黄酮成分, 难以 用 《 中国药典》规定的方法区别, 急需一种简便、可 靠的理化鉴别方法。为此, 国内学者何报作等人探 索用紫外光谱鉴别, 并观察到不同季节对其无影 响, 重现性强, 可供鉴别参考。方法如下: 采用无水 乙醇为空白, 比色池厚度为 1 cm, 波长范围在 200～ 500 nm, 狭缝 2 nm, 绘制紫外吸收曲线。侧柏叶的 吸收曲线为一平缓的降曲线, 可取两个吸收峰 ( 268± 2 nm,411± 2 nm) , 但过于微弱, 有时甚至不 出现; 柏树叶有两个强而明显的吸收峰 ( 274± 1 nm, 330± 2 nm) 。总之, 两者的紫外光谱区别明显、易识 别、操作简便, 可作为鉴别依据。国内学者周有华等 研究了羚羊角及其骨角塞粉在乙醇浸出物的紫外 光吸收光谱。实验表明它们的图谱是有明显差别 的。羚羊角分别在 203 nm和 403 nm波长处有大 吸收峰, 在 208～ 277 nm 处有 4 个小峰, 在 207 nm 处有一较宽较高的平坦峰。而骨塞仅在 210 nm 和 215 nm 处有一大吸收峰, 在 217 nm 处有一个小 峰。因为紫外吸收曲线有明显的区别, 所以能够对 它们加以区别。2 定量分析 2.1 显色比值法 王宇等对半夏药材采用超声提取, 依据酸性染 料比色法的原理, 在 pH=5.40 缓冲溶液中加入 0.1 μ g 溴麝香草酚蓝显色剂, 在 416 nm 处利用紫外分光 光度法测定药材中总生物碱的含量。其在 1.40～ 7.00 μ g 范围内与吸光度呈良好的线性关系, 斜率 r=0.9996, 平均回收率为 102.02%, 相对标准偏差 RSD=2.38%, 结果表明此方法简便准确[3]。张菊红等 对照品蒺藜皂苷 FSA-1 和蒺藜总皂苷分别溶于硫 酸- 甲醇 ( 7∶ 3) 溶液中, 于 60 ℃作用 15 min 后, 用分 光光度法在 319 nm 处测定蒺藜总皂苷的含量, 浓 度与吸收值之间有良好的线性关系, 斜率 r=0.9996, 平均回收率为 98.22%, 相对标准偏差 RSD=1.61%。 通过测定 6 批蒺藜全草中总皂苷的含量, 表明本法 简单, 重现性好, 结果准确[4]。 2.2 双光束紫外分光光度计测定法 黄书铭等利用紫外分光光度计法建立一种快 速检测和定量测定灵芝中三萜类化合物含量的方 法。以饱和 NaHCO3 溶液溶解灵芝三萜单体化合物 标准样品后, 采用双光束紫外分光光度计测定溶液 在 257 nm 大吸光度, 标准品在 0～ 200.0 μ g/ml 光 度与浓度呈现良好的线性关系, 相关系数为斜率 r= 0.99988。利用紫外分光光度法提取三萜类化合物工 艺的中间阶段, 即碱提的 NaHCO3 层进行检测, 根据 标准曲线计算出样品中的三萜类化合物的含量。该 测定方法简单快速、准确度高、实验误差小、重复性 好, 可以用于灵芝及其相关产品的质量评估[5]。 2.3 薄层- 紫外分光光度法 王京昆等应用薄层色谱- 紫外分光光度法成功 地测定了鬼臼毒素的含量。其方法为定量称取适量 用品, 用乙醇制成浓度为 7 mg/ml 层清液。在紫外 分光光度计下,200～ 400 nm 扫描, 结果大吸收波 长为 292 nm, 佳点样量为 30 μ l。此法测定鬼臼毒 素的含量, 方法稳定、重现性好、回收率高, 不失为 一种可普及的使用方法[6]。专家徐汝明等用紫外分光光度仪测定了贝母中腺苷的 含量。以甲醇为参比, 测定在 260.0 nm 吸光度, 作 工作曲线, 腺苷在 31.4 μ g/ml 浓度时, 其浓度与吸 光度呈良好的线性关系, 回归方程为 C=18.04A0.087, 斜率 r=0.9999,平均回收率为 96.3%, 相对标 准偏差 RSD=1.35% ( n=5) 。此法是用薄层层析- 紫 外分光光度法建立药用植物的腺苷含量的测定方法, 使之成为贝母内在质量评估的一个新指 标, 也为不同品种贝母的临床应用提供了一定的参 考。常军民等用薄层分离新疆鼠尾草中 6,7- 去氢 罗列酮, 于 330 nm 处采用紫外分光光度法测定其 含量。当含量为 0.37%时, 在 10～ 15 μ g 的范围内具 有良好的线性关系, 斜率 r=0.9998, 平均回收率为 98.3%, 相对标准偏差 RSD=2.58%[7]。国内学者林辉 以乙醇提取药材, 醋酸乙酯萃取, 聚酰胺柱层析分 离, 为于 360 nm 处用紫外分光光度法测定高良姜 的质量指标提供方法依据。 2.4 导数法 由于导数光谱具有可消除干扰、分辨率高的优 点, 所以不同的中草药的导数光谱图因所含化学成 分的不同而有差异, 故可作为中草药有效成分鉴定 的手段之一。如一阶导数光谱法鉴别 5 种贝母。5 种贝母均在 204 nm处有一尖峰, 湖北贝母、浙贝母 和东贝母均在 212 nm 有一尖峰, 湖北贝母和浙贝 母在 255～ 270 nm有一平滑弱吸收峰, 平贝母和川 贝母在 255～ 270 nm均是零。它们的一阶导数光谱 不同, 易于鉴别[8]。 3 趋势和展望
紫外分光光度法作为药物分析的一种常用方 法, 由于其仪器简便、快速, 结果准确而得到普遍应 用。将紫外分光光度法与其它分析方法联用, 如可 见分光光度法, 薄层色谱法等将会成为药物分析鉴 定中常用的手段。